产品规格
货号：KTSM101L
规格：100 μL/支
pUC19(control vector，100 pg/μL）：5μL
保存条件：-80℃
有效期：6 个月
运输：干冰运输
基因型
F -，φ80dlacZ △M15，△(lacZYA-argF )U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk -，mk+ )，phoA,
supE44，λ -，thi-1，gyrA96，relA1
产品说明
DH5α 菌株是实验室最常用的感受态细胞。缺失核酸内切酶（endA）, 提高了质粒 DNA 的
产量和质量；重组酶缺陷型（recA）减少插入片段的同源重组概率，保证了插入 DNA 的稳
定性；lacZ△M15 的存在使 DH5α 可用于蓝、白斑筛选。DH5α 感受态细胞经特殊工艺制
作，pUC19 质粒检测转化效率 >10⁸ cfu/μg DNA。
操作方法
一、热激转化法
1. 从-80℃冰箱取出感受态细菌冰浴融化后，吸取 100 uL，加入目的质粒（连接产物）, 轻
轻混匀，冰浴 30 分钟。
2. 42℃ 水浴热激 60 秒，迅速放回冰中并静置 2 分钟，该过程不要摇动。
3. 向管中加入 700 μL SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），37℃、200 rpm/min、45 分钟培
养复苏。
4. 根据实验要求（质粒、重组连接产物转化），吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含
相应抗生素的 LB 琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。倒置平板，37℃ 过夜培养。如果进
行蓝白斑筛选操作，将平板放 37°C 培养至少 15 小时。
二、10 分钟快速转化法
注：在使用卡那霉素，四环素等作为筛选抗性时，需要在 SOC 培养基中复苏以提高转化效率，当使用氨
苄青霉素作为筛选抗性时，该步骤可以省略。感受态细胞-DNA 混合物在冰上孵育 5-10 分钟后加入 4 倍
体积的 37℃温浴的 SOC 培养基，在 37℃ 180 rpm 孵育 1 小时，然后转移到 37℃预热的 LB 培养基上。
1. 提前 15 分钟将用到的筛选培养基平板拿到 37℃预热。
2. DH5α 感受态细胞从 -80℃ 拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA
（质粒或连接产物）并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰中静置 5 分钟。
3. 用200 μL 枪将感受态细胞-DNA 混合物转移到已经37℃ 预热的LB培养基上，涂均匀，
表面无水渍。
4. 将平板倒置放于 37℃ 培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃ 培
养至少 15 小时。
注意事项
1. 刚刚化冻的细胞，转化效率最高。
2. 避免反复化冻。
3. 避免移液枪吹吸。
4. 整个操作过程要轻柔。
5. 重组产物不建议用 10 分钟快速转化法。
声明：本产品仅供科学研究使用，不能用于人、动物的医疗或诊断程序，不
能使用本产品作为 食品、化妆品或家庭用品等。
